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安化黑茶提取物抑制小鼠结肠炎症的实验研究

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-12-02 来源:《中南林业科技大学》 作者:陈宇 浏览次数:224
 安化黑茶提取物抑制小鼠结肠炎症的实验研究
陈宇

      安化黑茶是采用湖南雪峰山脉茶区大中叶群体品种的鲜叶,经过杀青、揉捻、渥堆、松柴明火干燥等四大工艺加工而成的,具有色泽黑褐油润,滋味醇和或微涩,汤色红明艳亮,略带独特松烟香的品质特征的毛茶和以其为原料蒸压成形的紧压茶总称。已有研究表明安化黑茶具有多种对人体有益的保健功能;而这些生理保健功效主要是由茶多酚、茶多糖及茶色素等起着主要作用。安化黑茶的生理保健功能被人们所熟知,例如抗氧化,清除氧自由基,降脂,调节脂代谢,降糖,调节糖代谢,保护心血管,抗肿瘤作用,抗菌抑菌作用等生理活性功能。有最新研究报导,安化黑茶提取物很有可能还具有生理抗炎的作用,但是具体作用机理机制暂时处于初级研究阶段。炎症性肠病(inflammatory bowel diseases,IBD),广义的解释包括各种的肠道炎性疾病,一般来说是累及回肠、直肠、结肠这些的都可以称作炎症性肠病,它的表现一般都是腹泻、腹痛,甚至有些人可以出现血便的症状。炎症性肠病主要包括,溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病。溃疡性结肠炎(UC)是一种能够致使直肠和/或结肠发炎并可以伴随溃疡的疾病,具体发病原因还不明确,但已有研究证实促炎和抗炎细胞因子的分泌失衡,在UC发病及病情发展中产生着重要的作用。
     本文研究对象为安化黑茶,通过建立葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的ICR小鼠结肠炎模型,探讨安化黑茶对肠炎的潜在保护作用及分子机理研究,为功能性食品的开发提供科学的理论基础。安化黑茶对DSS诱导ICR小鼠结肠炎的抑制作用ICR小鼠连续饮用3%DSS 7 d诱导溃疡性结肠炎,用安化黑茶提取物灌胃,评估安化黑茶的抗炎作用。实验中可以观察到DSS组小鼠体重减轻明显,毛色暗淡,精神萎靡,其排泄物肉眼可见血性粘液,腹泻症状严重,与空白组小鼠DAI评分相比,DSS组小鼠DAI评分明显提高(p<0.01)。实验小鼠灌胃安化黑茶提取物后,可以观察到上述病症得到明显的缓解。与DSS损伤组相比,高剂量安化黑茶提取物和低剂量安化黑茶提取物组的小鼠均能缓解ICR小鼠体重的下降,降低粪便隐血发生率,减少腹泻次数,且高剂量浓度安化黑茶提取物组作用效果更加明显。DSS组小鼠结肠肠壁明显增厚,肠粘膜出现严重的充血、水肿;相对于对照组,小鼠结肠长度明显缩短(P<0.01);相对于对照组,髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)活性明显增高,而安化黑茶提取物灌胃的两个浓度组小鼠MPO和丙二醛浓度明显下调(p<0.01);同时,安化黑茶提取物灌胃小鼠结肠壁未有明确增厚和结肠黏膜充血症状得到有效的改善。
    实验说明安化黑茶可以改善溃疡性结肠炎小鼠免疫系统紊乱,降低结肠组织中MPO和MPO的含量,减少小鼠结肠炎症组织的损伤。相对于对照组小鼠,DSS组小鼠结肠组织炎症因子TNF-α、IL-lβ和IFN-y mRNA的相对表达水平明升上升,而补充安化黑茶提取组小鼠结肠这些炎症因子则受到明显抑制;采Western blot技术分析小鼠结肠炎症因子蛋白表达水平,其结果与RT-qPCR技术分析结果基本一致;进一步采用免疫组化技术,确定补充安化黑茶提取组小鼠结肠组织炎症因子表达下降,提示安化黑茶能抑制DSS诱导的小鼠结肠炎症组织炎症因子的表达。安化黑茶抑制LPS诱导巨噬细胞的炎症及炎症因子表达巨噬细胞RAW264.7在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的炎症体外模型,采用安化黑茶提取物处理,在细胞水平确定其是否具有抗炎作用及可能的分子机理。安化黑茶对LPS诱导RAW264.7细胞毒性影响。不同浓度的安化黑茶提取物处理RAW264.7细胞24 h后,发现各组细胞数量排列密集,形状呈梭状,生长状态良好,细胞状态无明显差异。采用MTS法检测对照组、安化黑茶组OD值之间无显著差异(p>0.05)。说明0~100μg/mL范围内,安化黑茶提取物对RAW264.7细胞无明显的细胞毒性,对其生长、状态及活性无影响,可用于后续实验研究。安化黑茶对LPS诱导RAW264.7细胞炎症因子表达的影响。分别采用RT-qPCR和Western blot比较各组细胞炎症基因表达差异。相对于对照组,LPS组细胞促炎因子TNF-α、IL-1β和IFN-γ的mRNA表达量和蛋白表达明显上升;相对于LPS组,安化黑茶提取物能够明显降低炎症因子的表达,且呈明显的量效关系。安化黑茶对LPS诱导RAW264.7细胞中转录活性的影响。核转录因子(nuclear transcription factor-KB,NF-κB/p65)是调控炎症因子表达的重要转录因子,TNF-α、IL-1β和IFN-γ基因启动子区域均存在一个或多个NF-κB的结合位点。分别利用荧光素酶报告基因技术,研究安化黑茶对NF-κB活性的影响。
    结果发现:与对照组相比,LPS诱导组细胞NF-κB相对荧光素酶活性(relative fluorescence intensity,RLU)显著升高;而安化黑茶提取物组细胞中RLU值显著减少,呈剂量依赖性,提示安化黑茶提取物可能通过抑制NF-κB的活性,从而抑制炎症因子表达。综上所述,安化黑茶提取物对DSS诱导的小鼠结肠炎症具有抑制作用,它能明显改善小鼠的炎症症状;安化黑茶提取物能下调关键炎症因子TNF-α、IL-lβ和IFN-γ的表达,其作用的分子机理可能与安化黑茶提取物抑制NF-κB的活性相关。(本文内容节选自《中南林业科技大学》硕士学位论文,作者:陈宇,仅供茶友学习交流使用,了解全文内容请至相关授权机构下载使用。)

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